分子生物工具书之：核酸转化-DNA

▋ DNA 提纯多门

人们如今对 DNA 的分析新方法，往往是通过多重 PCR、real-time PCR 和对贵重事件的研究来来进行的，因此高品质提纯 DNA 非常重要。高品质的分析新方法产物是获得高品质的上游检查结果的充份。我们只能了解 DNA 提纯控制系统的工作定律，然后针对在此之后应用为了让最适合的化学过程。

DNA 提纯罕见的挑战

● 甘油样品从而释放出来 DNA● 将 DNA 大分子与脂质、核糖体、糖类和 RNA 等其他大分子分离出来● 维持 DNA 大分子的完整性

DNA 来源各有不同随之而来的挑战也各有不同。例如巧克力等饮品，其中的成份消除性的氟化物，如果这些氟化物被已提纯的 DNA 装载，则可能消除上游的检查。从革兰氏阳性酵母菌中的分离出来 DNA 所需高效的甘油酵母菌厚厚的肽聚糖核糖体壁。一定要确保你用作的 DNA 提纯新方法能够解决样品随之而来的问题。

甜蜜提示：尿液和组织样品在用作前需冷冻保存，以尽量减少限制性对 DNA 的破坏。在取出一小部分来进行 DNA 提纯之前需将解冻后的尿液完全混。

DNA 提纯基本步骤

DNA 提纯：甘油、转化和洗涤

甘油：破坏核糖体或组织-复合物东南侧理-机械破坏-去垢剂东南侧理

甘油：使核糖体变性或失去活性-镁去垢剂、加热、还原剂、尿素和抗病毒类-蛋白复合物（如蛋白复合物 K）

甘油：使内源性限制性-螯合剂（例如 EDTA）-蛋白复合物（例如 蛋白复合物 K）

转化与洗涤：分离出来 DNA-去除其他核酸（如 RNA）-去除核糖体 •有机化学合成 •醋析 •与固相合表征转化 -硅酸盐细胞内 -阴镁比如说柱 -磁微粒

转化与洗涤：从其他核糖体固体中的分离出来 DNA 的新方法

■ 有机化学合成

当苯甲酸或苯甲酸: 混物与核糖体甘油物混时，会形成两相合：水相合和有机相合。极性 DNA 大分子转至极性相合或「水相合」，而变性的核糖体和其他核糖体碎片则转至有机相合。

■ 醋析

醋可以让核糖体脱水，从而降较低其聚合，然后变性，变性后的核糖体归因于溶解性从而溶解；通过离心法去除溶解的核糖体和核糖体碎片。中用的醋包括包括纯水、乙酸钾或乙酸铵。

■ 与固相合表征转化

绝大多数的 DNA 提纯新方法主要依据的定律是：通过特异性地与固相合表征转化, 从而从粗甘油物中的提纯 DNA。这类固相合表征包括硅酸盐表征和阴镁比如说酯。往往来说，用作固相合表征提纯 DNA 比其他新方法用时更短、操作更便捷，因为不所需任何有机溶剂，而且可以微型化和数据处理从而实现高通量。

与 DNA 转化的固相合表征类型

硅酸盐细胞内：DNA 会在高浓度离液醋（例如醋酸抗病毒）不存在的情形与硅酸盐转化，但是核糖体不想。可以用作成份乙醇的洗涤液正因如此醋，然后在较低镁强度的水溶液（例如 TE 或水）中的下手 DNA。

阴镁比如说柱：提纯的主要定律是 DNA 中的带负电荷的磷酸碳原子与比如说柱上带正电荷的大分子之间相合互作用。在较低醋条件下，DNA 与表征转化，而核糖体和 RNA（取决于所用的缓冲液）则被洗涤正因如此。DNA 可以用高醋缓冲液下手。

在微粒表面来进行的 DNA 磁分离出来：许多商品化试剂盒的工作定律是用作磁微粒从水溶液中的捕捉 DNA。磁微粒可以由硅酸盐等材料制成，DNA 的转化和下手取决于醋浓度或 pH。

DNA 、浓度和完整性

纯的、完整的 DNA 对于许多上游量度至关重要。中用评估 DNA 的中用新方法是在 260nm 的无线电波东南侧（DNA 在该无线电波下有第二大用者收岭）量度样品用者光谱。通过量度 280nm 无线电波东南侧的用者光谱，并且计算 260nm 与 280nm 东南侧的用者光谱之比，可以检查出提纯过程中的可能用作到的或受到破坏在样品中的的其他有机氟化物。萤光染料和 qPCR 是计算 DNA 浓度并已确定制品完整性的替代新方法，主要在本简介在此之后关于核酸定量分析副标题来进行详细研讨。

图片来源：普洛麦格